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多模式动物活体成像系统常见问题及解决方案

发布日期:2022-01-27 发布人员: 浏览次数:40

多模式动物活体成像系统在实际的实验中除了操作外,还特别要注意一些实验条件和优化方案,以便我们做出正确的选择,得到想要的数据。下面就和小编一起来看看有多模式动物活体成像系统实验中的注意事项吧!

动物模型是现代生物医学研究中重要的实验方法与手段,有助于更方便、更有效地认识人类疾病的发生、发展规律和研究防 治措施,同时大鼠、天竺鼠、小鼠等小动物由于诸多优势在生命科学、医学研究及药物开发等多个领域应用日益增多。近年来各种影像技术在动物研究中发挥着越来越重要的作用,涌现出各种小动物成像的专业设备,为科学研究提供了强有力的工具。以PerkinElmer IVIS Lumina III 小动物活体成像系统为例,使用该仪器的实验过程中仍有较多注意事项,总结如下:

一、多模式动物活体成像系统活体光学成像常见问题及解决方案

1. 自发荧光的可变性

a 在不同激发光条件下,自发荧光会有明显不同;

b 动物身体的不同部位会有不同的自发荧光;

c  同一只动物在不同时间自发荧光的波谱和强度也可以不同;

d 不同小鼠的自发荧光在波谱和强度上也有差别;

e 有时会受到饲料的影响。

解决方案:体内实验需设定对照,包括阳性对照和阴性对照。

2.探针浓度的影响

荧光探针通常通过尾静脉打入体内,探针会被动物的血液和组织稀释,如果没有明显的靶向,在活体内信号会比较弱。

解决方案:确保荧光探针表现稳定可靠。探针在打入体内之前先进行成像,确定发射波谱和强度;考察不同批次探针之间是否存在差异,是否有猝灭现象,还可以用血液等生物体液溶解探针观察是否存在变化。

实验初期,尽量选择较高浓度或发光强度的探针,在对考察探针体内靶向及代谢情况比较了解之后再考虑减少含量,达到最 优的生物学效果。

3.受位置影响较大

 如果探针靶向的部位距体表较远,一方面激发光的射入会减少,同时发射光也会被组织吸收,位置越深,减少越多。组织和血液吸收相对较少的光波长在600-900nm之间。

解决方案:通过已有信息和时间变化来确定。如果已知所考察探针是亲肝的或亲肾的,在活体内在肝或肾的部位出现信号的聚集, 那么此处的信号可能会是所考察探针的信号;另外根据信号随时间的变化来确定是不是所要的信号,比如肿瘤部位的某种信号在注射探针后有明显的随时间的上升后下降的过程,这种现象也提示这个信号就是所考察探针的信号。

其他补充:利用荧光素酶基因做报告基因的生物发光成像,不需要激发光即可成像,因此由动物自发荧光所造成的背景噪音很少。且其发出的光谱大部分可穿透组织被高灵敏度CCD(Charge Coupled Device,电荷耦合器件)检测到。因此建议做细胞发展进程相关研究的,可以整合荧光素酶基因作为报告基因。


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